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看完此文你就知道细胞培养基应该如何配制了

发布时间:2022-02-21      点击次数:144
 
  细胞培养基的种类繁多,细胞培养方式也较多,如何正确地使用培养基及大程度地保持培养基的营养以维持细胞的生长,对每个培养者都很重要。培养基的使用依不同的培养基种类、培养方式、细胞种类的不同而存在差异。
 
  细胞培养基的配制:
 
  1.干粉培养基原倍液的配制
 
  1)配制过滤除菌的细胞培养基
 
  (1)阅读培养基使用说明,确定需要添加何种添加剂(如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等)。
 
  (2)根据所需将培养基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)将袋内残留培养基洗下,并入容器。加注射用水至总体积的95%,轻微搅拌溶解。
 
  (3)加入规定量的碳酸氢钠及所要添加的物质。
 
  (4)轻微搅拌溶解,加注射用水至规定体积。
 
  (5)用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至所需值。
 
  (6)用0.22μm滤膜正压过滤除菌。
 
  (7)溶液应在2℃-8℃下避光保存。
 
  具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书。
 
  2)配制可高压灭菌细胞培养基
 
  (1)根据所需将培养基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)将袋内残留培养基洗下,并入容器。加注射用水至总体积的95%,轻微搅拌溶解。
 
  (2)在121℃、15psi下灭菌15分钟。
 
  (3)待溶液冷却至室温,加入无菌0.2mol/LL-谷氨酰胺溶液规定体积、无菌7.5%(w/v)碳酸氢钠溶液规定体积,加注射用水(20℃~30℃)至规定体积,混匀。
 
  (4)如果必要,用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至所需值。
 
  (5)溶液应在2℃-8℃下避光保存。
 
  具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书。
 
  2.注意事项
 
  1)细胞培养用水一般为三蒸水(经石英蒸馏器蒸馏)或超纯水,医药生产上一般为注射用水。
 
  2)建议尽量选择与所用量相匹配的包装一次使用,因为包装一旦打开,组分可能会变质或因受潮而结团。
 
  3)溶解干粉培养基时先加入终体积90%-95%的培养用水,添加剂加完后再补足。
 
  4)如需添加的组分较多时,某一组分完全溶解后,再添加另一组分。
 
  5)待培养基完全溶解后再加入碳酸氢钠,以免产生沉淀。
 
  6)所有成分完全溶解后,培养基应立即过滤或高压除菌,以免产生沉淀或有微生物污染。
 
  7)在过滤除菌时,一般情况下应调pH比所需值低0.1~0.2个单位,因过滤除菌后,pH值会升高约0.2。
 
  8)在细胞培养过程中,建议不加或加少量的抗生素,如血清的浓度较低则所加抗生素的量也要相应降低一些。
 
  9)建议用1NHCl或1NNaOH来调节培养基的pH,因为用碳酸氢钠来调对培养液的渗透压影响比较大。
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