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让专业人员告诉你细胞培养基应该如何配制

发布时间:2021-09-07      点击次数:50

    细胞培养基的种类繁多,细胞培养方式也较多,如何正确地使用培养基及大程度地保持培养基的营养以维持细胞的生长,对每个培养者都很重要。培养基的使用依不同的培养基种类、培养方式、细胞种类的不同而存在差异。

    细胞培养基的配制:

    1)配制过滤除菌的细胞培养基

    (1)阅读培养基使用说明,确定需要添加何种添加剂(如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等)。

    (2)根据所需将培养基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)将袋内残留培养基洗下,并入容器。加注射用水至总体积的95%,轻微搅拌溶解。

    (3)加入规定量的碳酸氢钠及所要添加的物质。

    (4)轻微搅拌溶解,加注射用水至规定体积。

    (5)用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至所需值。

    (6)用0.22μm滤膜正压过滤除菌。

    (7)溶液应在2℃-8℃下避光保存。

    具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书。

    2)配制可高压灭菌细胞培养基

    (1)根据所需将培养基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)将袋内残留培养基洗下,并入容器。加注射用水至总体积的95%,轻微搅拌溶解。

    (2)在121℃、15psi下灭菌15分钟。

    (3)待溶液冷却至室温,加入无菌0.2mol/LL-谷氨酰胺溶液规定体积、无菌7.5%(w/v)碳酸氢钠溶液规定体积,加注射用水(20℃~30℃)至规定体积,混匀。

    (4)如果必要,用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至所需值。

    (5)溶液应在2℃-8℃下避光保存。

    具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书。
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