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细胞冻存的操作步骤是什么?

发布时间:2022-09-20      点击次数:69
  1、配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的冻存培养液;
  2、取对数生长期的细胞,去除旧培养液,用PBS清洗。
  3、去除PBS,加入适量胰蛋白酶(覆盖培养皿表面)把单层生长的细胞消化下来;
  4、离心1000rpm,5min;
  5、去除胰蛋白酶,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml~1×107/ml;
  6、细胞分装入冻存管中,每管1~1.5ml;
  7、在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者;
  8、冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/min;当温度达-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。
  注意事项
  1、从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞用于冻存,最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液;
  2、将冻存管放入液氮容器或从中取出时,要做好防护工作,以免冻伤;
  3、冻存和复苏最好用新配制的培养液。
  
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