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使用细胞计数板时一定要注意哪些事情

发布时间:2022-03-23      点击次数:275
 
  细胞计数板是一种常用的细胞计数工具,医学上常用来计数红细胞、白细胞等而得名,也常用于计算一些细菌、真菌、酵母等微生物的数量,是一种常见的生物学工具。
 
  细胞计数板的注意事项:
 
  镜检计数室。因前一次清洗不到位,或者保存过程中存在污染,更或者因操作不当导致的计数室存在划痕,若不及时清洗或更换,则会对后期实验计数产生极大影响。所以,在每次使用血球计数板之前都需要加一步镜检计数室,如若在镜检时发现计数室有污物,则需按要求清洗并吹干后再进行实验。
 
  摇匀后取液。在吸出培养液进行计数之前,需轻轻震荡试管,使菌体分布均匀,防止聚沉淀,从而提高计数的代表性和准确性。
 
  先盖血盖片后加菌液。在菌悬液摇匀后,应先在血球计数板上盖上血盖片,再用滴管吸取少许菌悬液,从计数区中间平台沿血盖片的上边缘滴入一小滴菌悬液,利用液体的表面张力一次性充满计数区。若先加菌液再覆盖血盖片,则容易因为菌液加入过多,而导致血盖片未与血球计数板支持柱接触,血盖片浮于菌液上方而导致最后计数偏大,同时会因为有气泡产生而导致计数偏小。
 
  静置片刻再计数。静置5min,待菌悬液不再漂浮流动,酵母菌全部沉降后再将血球计数板放到显微镜下进行计数。先在低倍镜下找到需要观察计数的大方格及中方格,将中方格移到视野中央,然后拨动转换器移至高倍镜进行计数。
 
  高倍镜下调亮度。低倍镜下,用平面镜和小光圈,可以清晰地看到血球计数板上的酵母菌。但是,拨动转换器换到高倍镜后,即使是用了平面镜和最小光圈,视野里往往还是白茫茫一片,什么都看不见,这时候可以尝试操作遮光器上的金属遮光片进行遮光处理。因为活的酵母菌和培养液的折光率相近,所以要在高倍镜下将视野调得暗一些。
 
  掌握计数原则。一般选择观察的菌液浓度控制在每个小方格内有4或5个菌体为宜,若其浓度太高,可适当稀释;并采用“计上不计下,计左不计右”的计数原则。
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